分子平臺推薦規(guī)劃


1. 分子生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)要求

分子生物實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化等級要求,但是為避免各個實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。

(1)試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)

  該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制,本區(qū)應(yīng)對外界保持微正壓。

(2)標(biāo)本制備區(qū)

  該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎海员苊鈴泥徑鼌^(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。

(3)PCR擴(kuò)增區(qū)

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA擴(kuò)增和擴(kuò)增片段的測定。此外,已制備的DNA模板(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進(jìn)行。

(4)PCR產(chǎn)物分析區(qū),該區(qū)域主要用于PCR產(chǎn)物的電泳、成像及分析,也可以兼容下游測序、雜交等實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)樣本主要為高濃度PCR產(chǎn)物,氣溶膠濃度極高,污染風(fēng)險(xiǎn)最大,應(yīng)嚴(yán)格保持負(fù)壓,并且獨(dú)立通風(fēng)。本實(shí)驗(yàn)室所有實(shí)驗(yàn)器具及人員實(shí)驗(yàn)服需要與其他實(shí)驗(yàn)室保持隔離,任何相關(guān)物品只進(jìn)不出,實(shí)驗(yàn)室中廢料也應(yīng)當(dāng)封存送出丟棄或清洗。為配合電泳需求,該實(shí)驗(yàn)室必須配有獨(dú)立水源及水槽。

2. 分子生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)圖范例

(1)常規(guī)4區(qū)PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)方案可見下圖:

圖片1.png


該方案可以簡化為三間,將產(chǎn)物分析區(qū)取消,并在遠(yuǎn)離此區(qū)域的另一件非分子生物實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行產(chǎn)物分析實(shí)驗(yàn)。

(2)在實(shí)驗(yàn)室分布條件不適合建立PCR實(shí)驗(yàn)室的時候,可以嘗試將已有潔凈實(shí)驗(yàn)室作為試劑準(zhǔn)備區(qū),已有開放實(shí)驗(yàn)室作為樣本制備區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū),并將遠(yuǎn)離這兩個區(qū)域的有水槽和水源的非核酸實(shí)驗(yàn)室內(nèi)安放電泳、成像等產(chǎn)物分析設(shè)備。

(3)在實(shí)驗(yàn)室空間不富足的情況下也可以通過分割空間的方式以單間實(shí)驗(yàn)室建立分子生物實(shí)驗(yàn)室,并同樣在遠(yuǎn)離此區(qū)域的另一件非分子生物實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行產(chǎn)物分析實(shí)驗(yàn)。參考方案可見下圖:


單間實(shí)驗(yàn)室分割方案1:

圖片2.png



單間實(shí)驗(yàn)室分割方案2:


圖片3.png




四、分子平臺推薦設(shè)備配置


儀器設(shè)備名稱

數(shù)量

放置區(qū)域

冰箱

1

試劑準(zhǔn)備區(qū)

渦旋混勻儀

1

試劑準(zhǔn)備區(qū)

臺式離心機(jī)

1

樣本制備區(qū)

掌上離心機(jī)

1

試劑準(zhǔn)備區(qū)

紫外線消毒車

1

試劑準(zhǔn)備區(qū)

潔凈工作臺

1

試劑準(zhǔn)備區(qū)

移液器

1

試劑準(zhǔn)備區(qū)

移液器

1

試劑準(zhǔn)備區(qū)

移液器

1

樣本制備區(qū)

移液器

1

試劑準(zhǔn)備區(qū)

移液器

1

試劑準(zhǔn)備區(qū)

紫外線消毒車

1

樣本制備區(qū)

臺式離心機(jī)

1

樣本制備區(qū)

掌上離心機(jī)

1

樣本制備區(qū)

勻漿儀

1

樣本制備區(qū)

總核酸OD濃度測定

1

樣本制備區(qū)

冰箱

1

樣本制備區(qū)

生物安全柜

1

樣本制備區(qū)

渦旋混勻儀

1

樣本制備區(qū)

PCR板封膜儀

1

樣本制備區(qū)

96孔板離心機(jī)(可選)

1

樣本制備區(qū)

核酸提取儀(可選)

1

樣本制備區(qū)

金屬浴

1

樣本制備區(qū)

水浴鍋

1

樣本制備區(qū)

移液器

1

樣本制備區(qū)

移液器

1

樣本制備區(qū)

移液器

1

樣本制備區(qū)

移液器

1

樣本制備區(qū)

移液器

1

樣本制備區(qū)

熒光定量PCR儀

1

PCR擴(kuò)增區(qū)

普通PCR儀器

1

PCR擴(kuò)增區(qū)

紫外線消毒車

1

PCR擴(kuò)增區(qū)

移液器

1

PCR擴(kuò)增區(qū)

移液器

1

PCR擴(kuò)增區(qū)

移液器

1

PCR擴(kuò)增區(qū)

移液器

1

PCR擴(kuò)增區(qū)

凝膠成像儀

1

產(chǎn)物分析區(qū)

電泳儀

1

產(chǎn)物分析區(qū)

電泳槽

1

產(chǎn)物分析區(qū)

脫色搖床(可選)

1

產(chǎn)物分析區(qū)

微波爐

1

產(chǎn)物分析區(qū)

電子天平

1

產(chǎn)物分析區(qū)

移液器

1

產(chǎn)物分析區(qū)

移液器

1

產(chǎn)物分析區(qū)

紫外線消毒車

1

產(chǎn)物分析區(qū)

超純水


試劑準(zhǔn)備區(qū)&樣本制備區(qū)

PCR試劑盒


試劑準(zhǔn)備區(qū)

PCR預(yù)混液


試劑準(zhǔn)備區(qū)

96孔PCR板


試劑準(zhǔn)備區(qū)

96孔板透明膜


試劑準(zhǔn)備區(qū)

八聯(lián)管和管蓋


試劑準(zhǔn)備區(qū)

各式槍頭


試劑準(zhǔn)備區(qū)&樣本制備區(qū)&產(chǎn)物分析區(qū)

電泳專用槍頭(可選)


產(chǎn)物分析區(qū)

EP管


試劑準(zhǔn)備區(qū)&樣本制備區(qū)

冰盒


試劑準(zhǔn)備區(qū)&樣本制備區(qū)


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